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细胞外泌体收集之前用什么样的培养液
细胞外泌体收集之前用什么样的培养液 绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上,添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物,其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。
PBS在外泌体提取中的具体用途PBS溶液(磷酸盐缓冲盐水)主要用于两个环节: 清洗细胞:在提取细胞培养上清中的外泌体前,需用PBS清洗细胞,以去除残留的血清蛋白等杂质,避免污染外泌体。
一般培养24-48h后细胞即可分离外泌体,在特殊情况下,如在培养基中添加特殊的化学物质,培养15-60min即可收集。因细胞死亡会分泌小体,所以在研究外泌体时细胞的死亡率一定要控制 5% 之内。未经处理的FBS中含有大量的外源外泌体,所以细胞培养一定要用经过处理不含外泌体的FBS。
收获:对于制备外泌体的分批培养,将细胞以0.2×10^6个活细胞/ml接种在20ml培养物中,然后在培养的第3天和第5天收获上清液。通过高速离心机以2,000×g离心5分钟沉淀细胞,并储存在-80°C超低温冰箱中。所有剩余的培养物上清液都用于分离外泌体。
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