【干货分享】你绝对不容错过的transwell迁移/侵袭实验
Transwell迁移/侵袭实验是细胞生物学研究中的重要工具，通过精确控制实验条件，可以深入探究细胞的迁移和侵袭特性。该实验在多个领域有着广泛的应用前景，为化妆品、抗癌药物、促愈合药物、干细胞以及肿瘤研究等领域提供了有力的支持。希望本文的分享能够帮助你更好地理解和应用这一技术，为你的研究工作带来帮助。
铺胶时垂直向小室底部中间加入，避免气泡产生。吸出未结合的基质胶时，确保移液管尖端不刮伤凝胶层表面。细胞接种：不同细胞具有不同的迁移和侵袭能力，可以设置细胞密度梯度，寻找适当的接种密度。小室放置过程中注意避免气泡产生，一旦产生需及时去除。
实验利用Transwell小室与配套培养板形成的两室系统，通过在高营养液与低营养液之间设置由细胞可穿透性膜分隔的空间，并在膜上室铺基质胶（Matrigel）来模拟肿瘤细胞在体内侵袭过程中遇到的典型基质。细胞被放置在凝胶的一侧，而趋化剂则放置在凝胶的另一侧。
做什么需要用到基质胶
①用棉签擦去基质胶和上室内的细胞②染色：采用0.1%结晶紫染色。这种方法有如下优势：(1).不需要固定细胞，直接染色即可。(2).配制简单方便。使用前2h在冰水混合物中解冻，用冰水浴一直保持温度在4度左右。把细胞打进胶里混匀，1：1混合。细胞数量延用文献报道，可预实验摸索。此BD的matrigel使用说明供参考。
可进行3D类器官培养与微环境等相关实验应用。基质胶是从富含胞外基质蛋白的EHS小鼠肿瘤中提取出基底膜基质，其主要成分有层粘连蛋白、Ⅳ型胶原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白，还包含生长因子和基质金属蛋白酶等。
第一类是适用于软组织粘接的医用胶，如皮肤、内脏、神经、肌肉、血管和粘膜。这类医用胶主要包括医用氰基丙烯酸酯和纤维蛋白生物型基质胶。第二类是用于硬组织粘接和固定的医用胶，例如牙齿、骨骼和关节。
PDO培养基本流程获得组织：组织类型主要有三种，即正常组织、肿瘤组织和活检组织。处理样本：剔除非上皮组织（脂肪和肌肉组织）后，进行消化解离。
在执行Transwell实验时，对于12孔板，通常每个孔会加入12毫升的培养基。这种实验的设计是通过一层特殊的膜来分离高浓度和低浓度的营养液。细胞被放置在低营养液的一侧，为了获取更多营养，它们会尝试穿越这层膜。膜上涂有一层基质胶，模拟细胞外基质，细胞必须先消化这层胶才能到达营养更丰富的一侧。
细胞种在上室，下室有营养成分，唯一不同的是细胞侵袭实验中，聚碳酸酯膜上室侧铺一层基质胶，用以模仿体内细胞外基质，细胞欲进入下室，先要分泌基质金属蛋白酶将基质胶降解，才可以通过聚碳酸酯膜。
杰特宁
基质胶是什么
基质胶是从富含胞外基质蛋白EHS小鼠肿瘤中提取的可溶性基底膜制备物，其主要由层粘连蛋白、Ⅳ型胶原、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（HSPG）和巢蛋白等组成，还包含TGF-β、EGF、IGF、FGF等多种生长因子。在室温条件下，基质胶聚合形成具有生物学活性的三维基质。
基质胶是从富含胞外基质蛋白的EHS小鼠肿瘤中提取出基底膜基质，其主要成分有层粘连蛋白、Ⅳ型胶原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白，还包含生长因子和基质金属蛋白酶等。
基质胶是复杂的混合物，目前BD生化试剂有Matrigel这类成品出售。在室温下，Matrigel可自动聚集产生类似于哺乳动物细胞基底膜的生物活性基质材料。
【五分钟讲实验】2024国自然热点巨噬细胞研究思路分析!
年国自然热点巨噬细胞研究思路可围绕其功能调控、免疫炎症作用及组织修复机制展开，结合基因编辑、动物模型及多组学技术进行深入探索。具体分析如下：巨噬细胞的功能与调控机制研究功能研究：吞噬作用：巨噬细胞通过模式识别受体（如TLR、NLR）识别病原体或细胞碎片，形成吞噬体并与溶酶体融合完成降解。
细胞焦亡发生机制研究思路核心分子机制：细胞焦亡依赖炎症小体介导的 Caspase 激活，Caspase-11 等被激活后切割 Gasdermin D（GSDMD），释放其 N 端活性片段（GSDMD-NT）。
国自然（国家自然科学基金）的研究趋势在每年都有所变化，但基于近年来的中标情况和热点分析，我们可以预测2024年的一些潜在研究热点。以下是从巨噬细胞、线粒体、自噬、炎症等持续热门方向，以及铁死亡、甲基化、细胞代谢等上升热点方向进行的详细剖析，并给出了具体的研究入手点。
巨噬细胞是一种位于组织内的白血球，源自单核细胞，具有识别清除病原体、杀伤靶细胞、抗原呈递、免疫调节等多种功能，在脊椎动物的非特异性免疫和特异性免疫中都起着重要的作用。巨噬细胞的研究已成为当下热点之一，并得到了大量的国家基金资助。
肿瘤微环境中免疫细胞的代谢表型大多数与肿瘤相关的免疫细胞都显示出偏向于糖酵解或脂肪酸氧化（FAO）的代谢程序。髓源性抑制细胞（MDSCs）和肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）可呈现出一系列广泛的代谢表型。
巨噬细胞作为先天免疫系统的关键组成部分，在维持组织稳态、促进伤口愈合以及调节炎症反应等方面发挥着重要作用。近年来，巨噬细胞的研究已成为国自然申请的热点之一，与之紧密相关的免疫调控领域更是备受关注。以下是近期发表的几篇关于巨噬细胞的高分文献，简要梳理了其中的研究思路和重要发现。
